跳到主要內容

小朋友都OK的洋菜凝膠電泳!

洋菜凝膠電泳 - Agarose Gel Electrophoresis


BP:
恰巧買了新相機,順便幫最近實驗做個教學筆記,
沒想到圖拍太多太仔細,連小朋友看了也會做,
不知道是為了拍照在拍照還是為了作筆記在拍照:P。
希望小朋友們看了也會做分生!

I. MATERIAL
 1. Agarose Powser
 2. 10X TBE (Tris-Borate-EDTA) Buffer Solution
 3. Ethidium Bromide (EtBr)
 4. DNA Samples
 5. DNA Marker
 6. ddH2O
 7. 鑄膠模 (Gel Rack)
 8. 齒梳 (Comb)
 9. 電子秤 (Electric Scale)
 10. 電源供應器 (Power Supply) 
 11. 微波爐 (Microwave Oven)
 12. UV照相儀 (UV Camera)

II. PRAPARATION
 1. Gel Percentages: Resolution Of Linear Dna On Agarose Gels
 (Ref: Promega Corporation)











Recommended
% Agarose


Optimum Resolution for Linear DNA
(Size of fragments in base pairs)


0.5


1,000–30,000


0.7


800–12,000


1.0


500–10,000


1.2


400–7,000


1.5


200–3,000


2.0


50–2,000



 2. Agarose Gel ( 2% Agarose ) : 100ml
  a. Agarose Powder : 2g
  b. 1X TBE : ~100 ml
  (加入2g Agarose後,加入1X TBE至100ml)

 3. Agarose Gel Electrophoresis Running Buffer ( 1X TBE ) : 500 ml
  a. 10X TBE : 50 ml
  b. ddH2O : 450 ml

III. PROCEDURE

1. 調配1X TBE 500ml:加入10X TBE 50ml 及 ddH2O 450 ml
clip_image002 clip_image004

2. 取出Ararose Powder 2g
clip_image006 clip_image008

3. 混合2g Ararose Powder與 1X TBE至100ml後(2% Agarose gel),以保鮮膜包覆瓶口
clip_image010 clip_image012

4. 將瓶口保鮮膜穿洞後置入微波爐,並以中微波(Medium)微波 4分鐘
clip_image014 clip_image016

5. 取出Agarose Gel 溶液,並確保溶液中無尚未溶解之殘留物。若仍有殘留則繼續微波加熱。(此時需注意高溫膠液外溢)
clip_image018
 clip_image020

6. Agarose Gel鑄膠模備製 (鑄膠模及齒梳)
clip_image022 clip_image024

7. 待Agarose Gel Solution降溫至室溫後,倒入已裝備齒梳之鑄膠模中。
clip_image026 clip_image028

8. 膠體倒入需注意不可高於齒梳縫隙上端以避免每個loading槽相通。而膠體凝固時將逐漸改變為灰白色狀。
clip_image030
 clip_image032

9. 膠體凝固後移除齒梳,其產生之槽孔即為樣本loading處,拿起膠座即可見灰白色塊狀膠體。
clip_image034 clip_image036

10. 將膠體連同膠座一併置入電泳槽內(左為負極右為正極),並加入1X TBE做為Running Buffer
clip_image038 clip_image040

11. Running Buffer液面需蓋過膠體,並利用針筒衝洗每個Loading槽孔
clip_image042 clip_image044

12. 取出樣本並進行Loading
clip_image046 clip_image048

13. Loading完成圖、側面圖示,loading過程中可用針統沖去溢出樣本
clip_image050 clip_image052

14. 接上電極於電泳槽上(左為負極右為正極),並施以100V電壓
clip_image054 clip_image056

15. 電泳過程與結果(120分鐘),條帶向正極移動。兩條色帶分別為bromophenol blue 及 xylene cyanol
clip_image058 clip_image060

16. 置入EtBr溶液中進行染色30分鐘,隨後取出並進行退染30分鐘
clip_image062 clip_image064

17. 啟動UV照相儀,並將膠體置入UV照相儀中
clip_image066 clip_image068

18. 調整膠體位置,開啟UV進行攝影調整(焦距、焦段及快門時間)並拍攝
clip_image070 clip_image072

19. Agroses Gel 拍攝圖
clip_image074

就這樣! 簡單又有趣!
大家一起動手做分生吧。

                BP 2008.07.16 

留言

這個網誌中的熱門文章

別再期末談臨終

『在那六年多的時間,我常常反省、後悔、卻也培養勇氣,問自己再遇到時要做什麼決定?.......回想我要簽同意書的時候,真的會抖-我有資格決定人家生死嗎?』 面對死亡,我們都很害怕,更何況是家人的臨終。 但究竟我們的選擇,是為了給家人最後的尊嚴? 還是填補自己的罪惡感? 學習勇敢面對、學習放下, 更要學著為自己的未來做好規劃,不成為子女的負擔。 希望大家一起鼓勵這個勇敢的朋友, 因為她的經驗分享,讓我們更加了解, 面對家人臨終,我們該如何做好準備。 『末期才談臨終太遲』 https://www.wacare.live/health-forum/q/1984983840830?topicId=25049764537230&fbclid=IwAR1ei-zrfSj9w5kbvBW5ecSbqWrI408fJ1qjXhisZwLxYdbON_jJbNKMAyY 更多的失智照護課程 https://www.wahere.wapro.live/udnxwacare Pan 2020.12.22 #臨終 #失智 #善終 #放棄急救 #預立醫療 #病人自主

Google 資料庫方案–Spreadsheet–(1)資料呈現

HEMiDEMi 的標籤: Google , Google SpreadSheet , 雲端 早在規劃『 教育,意義! 』project時, 便有打算將整個網站建立過程撰寫一篇教學,讓有興趣以google 服務為基礎進行開發的朋友參考。 沒想到這個想法擺著就拖了好幾個月, 好在學生提出了問題,就趁這機會寫一寫吧。 基本上『 教育,意義! 』網站的架構完全建立在Google提供的服務, 廣義來說也是個雲端的系統, 所有的資料是分散在不同的服務架構下,再用GAE, Javascrript將服務資訊串接起來, 由Blogspot 統一呈現。 省了租主機的費用,或架站的硬體、電費, 最好的地方在於不用管理主機維運的問題, 只要專心做我的創意、嘗鮮就好了!!   多棒! 若將『 教育,意義! 』網站依功能層次來分類,可以分為三層結構, 當中的層次與使用技術大致如下: UI 介面層 服務 : Blogspot (網站介面) , Picasa (相簿空間), Google Apps 技術 : Javascript , AJAX ( JQuery ) App應用層  服務 : Google App Engine (GAE) 技術 : Java, Java Server Page (JSP) 資料層 服務 : Google Docs (文件), Google Spreadsheet (試算表) 技術/函式庫 : Java, Google Data APIs 本篇文章將著重在介紹以Google Spreadsheet 做為雲端資料庫, 其他主題將會陸續推出。 若對Google API 與 Google App Engine 初步建置有興趣, 可以參考之前文章: 佛心來著的 Google Data API – for JAVA 雲端的開始:Netbeans 無痛 Google App Engine Java 服務開發 Google Spreadsheet 做為資料庫系統 對於小型的資料系統來說, 採用Google Spreadsheet做為應用程式資料庫(如問卷調查或線上系統) 也算堪用, 目前的儲存限制為 : 40 萬個儲存格 每張工作表最多 256 欄 而Goog

物聯網與大數據時代下的個人化精準醫療

Source:  idownload blog 2014 年,當致力於電子病歷 (Electronic Medical Record, EMR) 分析,藉以尋找癌症機轉與治療方法的大數據公司 Flatiron Health 獲得 Google 創投( Google Ventures )高達 1.3 億美元投資後 [1] ,個人化精準醫療( personalized medicine )隨即成為火紅的熱門主題,這樣一股氣勢發展,讓美國總統歐巴馬 (Obama) 更在今年提出精準醫療計劃( Precision Medicine Initiative) ,並投入 2016 年預算高達 2.15 億美金之譜 [2] 。 在精準醫療這般的強勢展開下,不僅僅只有過去生物資訊上基因體學、轉錄體學上的資料探勘或是電子病歷醫療健康數據分析,物聯網 (Internet of Thing) 的發展也同時透過行動裝置與消費型穿戴式裝置大舉進入個人化健康促進與醫學上疾病研究領域。在這機電感測裝置快速發展下,各種輕巧卻具備多種感測裝置的隨身穿戴式裝置逐漸普及於消費電子商品市場,各家廠商發展出豐富的產品功能不僅能記錄活動頻率,更能偵測活動強度、睡眠狀態、作息規律,更甚至能取得穿戴者 24 小時的心跳狀態與壓力疲勞狀態,並利用這些生理數據進行健康促進的提醒與建議。