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小朋友都OK的洋菜凝膠電泳!

洋菜凝膠電泳 - Agarose Gel Electrophoresis


BP:
恰巧買了新相機,順便幫最近實驗做個教學筆記,
沒想到圖拍太多太仔細,連小朋友看了也會做,
不知道是為了拍照在拍照還是為了作筆記在拍照:P。
希望小朋友們看了也會做分生!

I. MATERIAL
 1. Agarose Powser
 2. 10X TBE (Tris-Borate-EDTA) Buffer Solution
 3. Ethidium Bromide (EtBr)
 4. DNA Samples
 5. DNA Marker
 6. ddH2O
 7. 鑄膠模 (Gel Rack)
 8. 齒梳 (Comb)
 9. 電子秤 (Electric Scale)
 10. 電源供應器 (Power Supply) 
 11. 微波爐 (Microwave Oven)
 12. UV照相儀 (UV Camera)

II. PRAPARATION
 1. Gel Percentages: Resolution Of Linear Dna On Agarose Gels
 (Ref: Promega Corporation)











Recommended
% Agarose


Optimum Resolution for Linear DNA
(Size of fragments in base pairs)


0.5


1,000–30,000


0.7


800–12,000


1.0


500–10,000


1.2


400–7,000


1.5


200–3,000


2.0


50–2,000



 2. Agarose Gel ( 2% Agarose ) : 100ml
  a. Agarose Powder : 2g
  b. 1X TBE : ~100 ml
  (加入2g Agarose後,加入1X TBE至100ml)

 3. Agarose Gel Electrophoresis Running Buffer ( 1X TBE ) : 500 ml
  a. 10X TBE : 50 ml
  b. ddH2O : 450 ml

III. PROCEDURE

1. 調配1X TBE 500ml:加入10X TBE 50ml 及 ddH2O 450 ml
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2. 取出Ararose Powder 2g
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3. 混合2g Ararose Powder與 1X TBE至100ml後(2% Agarose gel),以保鮮膜包覆瓶口
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4. 將瓶口保鮮膜穿洞後置入微波爐,並以中微波(Medium)微波 4分鐘
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5. 取出Agarose Gel 溶液,並確保溶液中無尚未溶解之殘留物。若仍有殘留則繼續微波加熱。(此時需注意高溫膠液外溢)
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6. Agarose Gel鑄膠模備製 (鑄膠模及齒梳)
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7. 待Agarose Gel Solution降溫至室溫後,倒入已裝備齒梳之鑄膠模中。
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8. 膠體倒入需注意不可高於齒梳縫隙上端以避免每個loading槽相通。而膠體凝固時將逐漸改變為灰白色狀。
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9. 膠體凝固後移除齒梳,其產生之槽孔即為樣本loading處,拿起膠座即可見灰白色塊狀膠體。
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10. 將膠體連同膠座一併置入電泳槽內(左為負極右為正極),並加入1X TBE做為Running Buffer
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11. Running Buffer液面需蓋過膠體,並利用針筒衝洗每個Loading槽孔
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12. 取出樣本並進行Loading
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13. Loading完成圖、側面圖示,loading過程中可用針統沖去溢出樣本
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14. 接上電極於電泳槽上(左為負極右為正極),並施以100V電壓
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15. 電泳過程與結果(120分鐘),條帶向正極移動。兩條色帶分別為bromophenol blue 及 xylene cyanol
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16. 置入EtBr溶液中進行染色30分鐘,隨後取出並進行退染30分鐘
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17. 啟動UV照相儀,並將膠體置入UV照相儀中
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18. 調整膠體位置,開啟UV進行攝影調整(焦距、焦段及快門時間)並拍攝
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19. Agroses Gel 拍攝圖
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就這樣! 簡單又有趣!
大家一起動手做分生吧。

                BP 2008.07.16 

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